FAQ

En s'appuyant sur un taux de réalisation de projets de 99,9 %, GENEWIZ peut synthétiser des séquences d'origine naturelle, des gènes à codons optimisés, des banques de gènes, des séquences complexes, de grandes séquences ou toute autre séquence dont vous avez besoin pour votre recherche, quelle que soit sa complexité.

Les oligonucléotides monocaténaires sont conçus, synthétisés et assemblé à l'aide de différents protocoles en fonction des caractéristiques de séquence. Ensuite, le gène pleine longueur assemblé est cloné dans le vecteur pUC57  ; l'insertion est vérifiée par séquençage d'ADN de Sanger et digestion de restriction.

GENEWIZ synthétisera les séquences de gènes clonés allant de 1 bp à plus de 50 kb, en utilisant des oligonucléotides d'ADN courts comme synthons.

GENEWIZ a une expérience éprouvée en matière de synthèse de matrices difficiles, telles que les séquences riches en GC et les séquences contenant des répétitions, à l'aide de technologies propriétaires. GENEWIZ optimise votre gène pour la synthèse grâce à sa plateforme bioinformatique. Dans certains exemples très rares, le contenu d'une séquence extrême peut être réfractaire aux techniques de vérification de séquences disponibles. GENEWIZ examine soigneusement chaque séquence pour estimer la difficulté et anticiper les défis du projet, puis personnalise chaque devis de projet de façon à inclure des délais d'exécution estimés et des informations tarifaires en fonction de cette analyse.

Pour les gènes jusqu'à 1,5 kb, les délais sont de 8-10 jours ouvrables. Avec la priorité de service TurboGENE™, la synthèse d'un gène prend seulement 5 jours ouvrables.

GENEWIZ propose un devis personnalisé pour chaque projet de synthèse de gènes. Pour la priorité Standard et les séquences de gènes types (non répétitives, à teneur en GC moyenne) qui ne nécessitent pas de sous-clonage personnalisé, aucun frais supplémentaire ne s'applique. Pour les gènes avec traitement accéléré, les séquences difficiles, les grandes insertions ou pour les projets requérant un sous-clonage personnalisé, les frais correspondants sont indiqués dans votre devis de synthèse de gènes à façon.

GENEWIZ peut fournir des gènes à codons optimisés, conçus pour répondre aux spécifications exactes de votre recherche. Vous pouvez examiner ces séquences généralement incluses dans le devis du projet avant de confirmer votre commande.

L'outil d'optimisation de codons GENEWIZ peut optimiser plusieurs paramètres essentiels pour stabiliser les fragments d'ADN et améliorer l'efficacité de l'expression des gènes. Les paramètres sont notamment les suivants :

• Biais d'usage des codons ;
• Teneur en GC ;
• Structure secondaire de l'ARNm ;
• Profils souhaités personnalisés ;
• Profils non souhaités personnalisés ;
• Séquences de répétition (répétition directe, répétition inversée et répétition en tandem) ;
• Sites de reconnaissance d'enzymes de restriction (délétion ou insertion).

Le gène pleine longueur assemblé est cloné dans le vecteur pUC57 et vérifié par séquençage de Sanger sur au moins un brin et une digestion de restriction.

Le clonage standard dans le vecteur pUC57 se produit généralement via l'enzyme de restriction EcoRV. Toutefois, la séquence finale exacte peut varier. Si vous avez besoin de sites de restriction spécifiques pour flanquer votre insertion, veuillez les inclure dans votre séquence génétique à synthétiser.

GENEWIZ propose gratuitement une version du vecteur pUC57 résistante à l'ampicilline et la kanamycine.

Les clients doivent fournir d'autres vecteurs que pUC57. Si vous devez cloner votre gène artificiel dans un vecteur personnalisé, veuillez envoyer à GENEWIZ l'ADN du vecteur et les informations pertinentes (p. ex. la taille du vecteur, la séquence, le site de clonage, le nombre de copies, etc.).

GENEWIZ effectue une vérification de séquences lors du processus de synthèse de gènes afin de s'assurer que le produit de synthèse est tel que prévu. Les constructions plasmides finales sont isolées par clonage et confirmées par l'analyse de séquences d'ADN de Sanger à au moins une profondeur monocaténaire de l'insertion synthétisée. Les fragments d'ACP purifiés sont vérifiés par séquençage sur les deux brins, bien que la vérification à l'extrémité des fragments soit limitée à la profondeur monocaténaire. Les sous-ensembles et les produits intermédiaires peuvent être clonés et vérifiés afin de s'assurer qu'ils contiennent la bonne séquence, si nécessaire. La revérification de séquences d'ADN après l'ajustement de la préparation d'ADN est disponible en option avec votre commande de synthèse de gènes.

Une fois votre gène artificiel réalisé, GENEWIZ fournit un package de données électroniques avec votre construction. Ce package de données, qui inclut les données de séquençage initiales de la vérification de constructions, facilite votre propre analyse.

Les livrables standard pour les projets de synthèse de gènes sont les suivants :

• 2-5 µg de plasmide lyophilisé contenant la construction synthétique souhaitée ;
• certificat d'analyse, incluant la digestion de restriction ;
• données de suivi de séquence avec alignement ;
• séquence du gène artificiel seul et dans le vecteur désigné.

Les tubes d'échantillon GENEWIZ contiennent 2-5 µg d'ADN plasmidique lyophilisé, ou 1-2 µg d'ADN de fragments d'ACP purifiés pour les projets de synthèse standard. Pour la remise en suspension, nous vous recommandons ce qui suit :

• Faites tourner le tube brièvement de façon à ce que son contenu soit au fond ;
• Remettez en suspension l'échantillon dans un volume adapté à vos besoins :
  • Par exemple, 20-50 µl pour ~0,25-0,1 µg/µl d'eau ultrapure ou de tampon TE ;
  • La solution de remise en suspension est dépendante des applications en aval, car le tampon TE peut interférer avec la manipulation d'enzymes ;
• Mélangez brièvement au vortex, laissez le tube d'ADN reposer pendant 2-10 minutes sur de la glace, puis remélangez au vortex.

GENEWIZ est parfaitement consciente de tous les risques et avantages liés à la recherche sur la synthèse de gènes. Sachant que les technologies de synthèse de gènes peuvent permettre la reconstruction de novo de dangereux pathogènes, GENEWIZ utilise des politiques et procédures de contrôle qualité rigoureuses afin d'éviter l'abus des gènes synthétisés. GENEWIZ surveille activement le document Screening Framework Guidance for Synthetic Double-Stranded DNA Providers, rédigé par le département de la Santé et des Services sociaux des États-Unis (HHS), ainsi que la liste Select Agents and Toxins proposée par le gouvernement des États-Unis.

Chez GENEWIZ, la protection de la propriété intellectuelle de nos clients est une priorité absolue. Les informations propriétaires sont toujours la propriété du client et GENEWIZ accorde la plus haute importance à la confidentialité et la vie privée. Des mesures de protection complètes permettent à GENEWIZ de gagner et conserver la confiance de tous ses clients, collaborateurs et partenaires. Pour plus d'informations sur la politique de confidentialité GENEWIZ, veuillez cliquer ici.

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La fonction de téléchargement de formulaire Excel de demande de devis de synthèse de gènes permet l'envoi de 500 séquences maximum par formulaire. Cliquez ici pour en savoir plus sur le formulaire de demande de devis de synthèse de gènes en masse téléchargeable. 

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L'équipe de gestion de projets GENEWIZ est composée d'experts spécialisés, soucieux de la réussite de votre projet. Ceux-ci sont disponibles pour répondre à toute question tout au long de la durée de votre projet de synthèse de gènes. De plus, l'équipe de gestion de projets GENEWIZ fournira d'importantes mises à jour à chaque étape du processus de synthèse de gènes, vous tenant ainsi informé durant toutes les phases de votre recherche.

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